LCMでは試料調製が結果を左右する
レーザーマイクロダイセクション（LCM）は、組織切片から目的の細胞や領域を選択的に回収する技術です。
がん研究、病理学、神経科学などで、特定の細胞集団を対象とした分子解析に利用されています。
しかし、LCMで目的細胞を回収できても、その後のRNAやDNA解析が必ず成功するとは限りません。
特にRNA解析では、組織の保存状態や染色方法、回収時間、回収細胞数などが結果に影響します。
そのため、LCMを利用する際には、試料調製から下流解析までを考慮した実験設計が重要です。
1. 下流解析の目的を明確にする
最初に、回収した細胞で何を解析するのかを決めます。
例えば、以下のような目的があります。
・RT-qPCRによる遺伝子発現解析
・RNA-seqによる網羅的発現解析
・DNA変異解析
・タンパク質解析
・特定の細胞集団の比較
必要な試料量や品質は解析方法によって異なります。
2. 試料の保存・固定方法を選択する
LCMでは、凍結切片やFFPE切片などを使用できます。
凍結切片は、核酸品質を重視する研究で利用されることがあります。
FFPE切片は、保存済みの病理組織を利用できる点が特徴ですが、固定条件によって核酸が断片化している場合があります。
試料の種類に応じて、適切な抽出方法を選択する必要があります。
3. 染色方法を検討する
目的細胞を正確に回収するためには、顕微鏡下で細胞や組織領域を識別する必要があります。
一般的には、H&E染色や免疫染色などが利用されます。
ただし、染色工程に使用する試薬や処理時間が、RNAやタンパク質の品質に影響する可能性があります。
そのため、下流解析に適した染色プロトコルを選択することが重要です。
4. 回収する細胞数・領域を決める
LCMでは、単一細胞から比較的大きな組織領域まで、目的に応じて回収範囲を設定できます。
しかし、少数細胞の回収では得られるRNAやタンパク質の量が限られます。
下流解析に必要な入力量を確認し、回収する細胞数や組織面積を計画する必要があります。
5. 回収時間と試料品質を管理する
特にRNA解析では、試料の取り扱い時間や環境条件が重要です。
LCMの作業中にRNAが分解しないよう、試料調製から回収、抽出までの工程を適切に管理します。
また、試料ごとの処理時間をできるだけ統一することで、実験間のばらつきを抑えられます。
6. 回収後の品質を確認する
回収した細胞や組織領域から核酸を抽出した後は、解析目的に応じて品質を確認します。
例えば、RNA解析では、RNA量や断片化の程度を確認することが重要です。
試料量が少ない場合には、微量試料に対応した抽出・増幅方法を検討します。
Accuva CellectによるLCMワークフロー
米国LAXCO社のAccuva Cellectは、IRレーザーとUVレーザーを搭載したLCMシステムです。
IRレーザーは単一細胞や少数細胞の捕捉に、UVレーザーは組織領域の切断に利用できます。
また、メーカーは、凍結切片やFFPE切片などの試料調製方法、回収後の核酸解析に関する技術資料を提供しています。
これらを参考にすることで、研究目的に応じたLCMワークフローを検討できます。
まとめ
LCMを利用した分子解析では、装置の性能だけでなく、試料調製、染色、回収量、核酸品質などを総合的に考慮する必要があります。
適切な実験設計によって、目的細胞の選択的回収と下流解析の再現性向上が期待できます。
Accuva Cellectは、IR・UVデュアルレーザーによって、さまざまな組織・細胞の回収を支援します。
LCM装置の導入や実験ワークフローについては、株式会社インミディアムまでお問い合わせください。
製造元：LAXCO（米国）
日本国内取扱い：株式会社インミディアム
https://www.inmediam.com